Efficacy of leptospiral commercial vaccines on the protection against an autochtonous strain recovered in Brazil

Abstract In swine and bovines, leptospirosis prevention and control is carried out via vaccination of susceptible animals using bacterins. However, the efficiency of leptospirosis vaccines has been questioned. This work aimed to investigate the potency of five leptospirosis vaccines sold commercially in Brazil, challenging the animals with one autochthonous strain of Leptospira, Canicola serovar, denoted LO4, isolated from swine. The standard protocol was followed, and renal carriers of Leptospira were identified among the surviving animals by culture and PCR. Of the five vaccines tested, only two proved effective. None of the surviving animals was positive by culture; however, one animal was positive by PCR. Three of the five vaccines sold commercially in Brazil for the immunization of swine or bovines failed the test of the efficacy to protect the vaccinated animals following challenge with an autochthonous Leptospira strain, Canicola serovar. The two vaccines provided protection against the renal carrier state in the surviving animals. The criteria used to produce leptospirosis bacterins sold commercially in Brazil must be reviewed. The industry should support researches on leptospiral vaccinology to improve the quality of the present vaccines and discover new immunogenic strains, because it is known that vaccination is one of the most important tools to increase the reproduction rates in livestock.

Prevalência de leptospirose em rebanhos bovinos no Pantanal de Mato Grosso do Sul / Prevalence of leptospirosis in cattle herds in the Pantanal of Mato Grosso do Sul

Foi realizado um estudo epidemiológico da leptospirose em fêmeas acima de 24 meses, provenientes de 246 rebanhos, e 2.766 animais amostrados aleatoriamente nos nove municípios que compõem a região do Pantanal de Mato Grosso do Sul, bem como identificados os fatores de risco associados à doença. As amostras de sangue foram coletadas no período de setembro a novembro de 2009 e examinadas pelo teste de aglutinação microscópica ante uma coleção de 24 antígenos vivos de Leptospira spp., representantes dos sorovares Australis, Bratislava, Autumnalis, Butembo, Castellonis, Batavie, Canicola, Whitcombi, Cynopteri, Grippotyphosa, Hebdomadis, Copenhageni, Icterohaemorrhagiae, Javanica, Panamá, Pomona, Pyrogenes, Hardjo, Wolffi, Shermani, Tarassovi, Sentot, Andamana e Patoc. Adicionalmente, representantes de doze estirpes de leptospiras isoladas no Brasil foram adicionados à coleção de antígenos do teste de soroaglutinação microscópica (SAM). A prevalência aparente foi de 66% e a prevalência real de animais infectados, de 79,80%, com intervalo de confiança (IC) de 95% (78,3-81,3) e 241 rebanhos apresentando pelo menos um animal reagente. Os sorovares mais prováveis foram o Hardjo seguido pelo Wolffi. Os resultados demonstram que a leptospirose bovina continua presente no Pantanal, com alta prevalência tanto em rebanhos quanto em indivíduos, sendo os principais fatores de risco para a doença o tipo de exploração e a raça.(AU)

This is an epidemiological study of leptospirosis in 24 month-old females from 246 herds. Two thousand, seven hundred and sixty six (2,766) animals were randomly sampled in the nine counties comprising the region of Pantanal of Mato Grosso do Sul, Brazil. The risk factors associated with the disease were also identified. Blood samples were collected from September to November 2009 and examined by the microscopic agglutination test (MAT) against a collection of 24 live antigens of Leptospira spp., representatives of serovars Australis, Bratislava, Autumnalis, Butembo, Castellonis, Batavie, Canicola Whitcombi, Cynopteri, Grippotyphosa, Hebdomadis, Copenhageni, Icterohaemorrhagiae, Javanica, Panama, Pomona, Pyrogenes, Hardjo, Wolffi, Shermani, Tarassovi, Sentot, Andamana, and Patoc. Additionally, twelve representatives of Leptospira strains isolated in Brazil were added to the collection of antigens for the microscopic agglutination test (MAT). The apparent prevalence was 66% and the actual prevalence of infected animals was 79.80%, with a confidence interval of 95% (78.3 to 81.3) and 241 herds having at least one reactive animal. The most likely serovars were Hardjo followed by Wolffi. Results show that bovine leptospirosis is still present in Pantanal, with high prevalence both in animals and herds, the main risk factors for the disease being the type of cattle farming and breeding.(AU)

Occurrence of anti-Toxoplasma gondii, Neospora caninum and Leptospira spp. antibodies in opossums (Didelphis spp.) in São Paulo State, Brazil / Ocorrência de anticorpos anti-Toxoplasma gondii, anti-Neospora caninum e antiLeptospira spp. em gambás (Didelphis spp.) no estado de São Paulo, Brasil

Opossum (Didelphis spp.) is an omnivorous marsupial native to the Americas that shows synanthropic behavior in urban areas. Despite its proximity to domestic animals and humans, knowledge of its participation in the epidemiology of some zoonotic agents is substantial. This study aimed to determine the presence of antibodies against Toxoplasma gondii, Neospora spp. and Leptospira spp. in blood samples collected from opossums in 18 municipalities in the state of São Paulo, Brazil, between 2003 and 2008. Blood samples from 343 opossums: Didelphis aurita (n = 256) and Didelphis albiventris (n = 87) were obtained. These were tested to detect antibodies against T. gondii, using the modified agglutination test (MAT-Toto; cutoff ≥ 25); Neospora spp., using the indirect fluorescent antibody test (IFAT; cutoff ≥ 25); and Leptospira spp., using the microscopic agglutination test (MAT-Lepto; cutoff ≥ 100). Frequency of anti-T. gondii, Neospora spp. and Leptospira spp. antibodies were in 22.7%, 1.5% and 3.5%, respectively. The serogroups-serovars of Leptospira spp. presenting positive MAT-Lepto reactions were: AutumnalisButembo; Mini-Mini; Ballum-Castellonis; Icterohaemorrhagiae-Icterohaemorrhagiae; Icterohaemorrhagiae-Copenhageni and Grippotyphosa-Grippotyphosa or Bananal. This study demonstrated that these zoonotic agents are circulating in opossum populations in the state of São Paulo. Therefore, investigations regarding the role of marsupials in the epidemiology of each of these diseases should be conducted, especially to understand the behavior of these animals as zoonosis maintenance hosts.(AU)

O gambá (Didelphis spp.) é um marsupial onívoro nativo das Américas que apresenta comportamento sinantrópico em áreas urbanas. Apesar da sua proximidade com animais domésticos e o homem, o conhecimento da sua participação na epidemiologia de alguns agentes zoonóticos é fundamental. Este estudo objetivou determinar a presença de anticorpos contra Toxoplasma gondii, Neospora spp. e Leptospira spp. em amostras de sangue colhidas de gambás de 18 municípios do estado de São Paulo, Brasil, entre 2003 e 2008. Foram obtidas amostras sanguíneas de 343 gambás: Didelphis aurita (n = 256) e Didelphis albiventris (n = 87). As amostras foram testadas para detecção de anticorpos contra T. gondii, utilizando o teste de aglutinação modificado (TAM-Toxo; ponto de corte ≥ 25); Neospora spp., utilizando a reação de imunofluorescência indireta (RIFI; ponto de corte ≥ 25); e Leptospira spp., utilizando a soroaglutinação microscópica (SAM-Lepto; ponto de corte ≥ 100). As frequências de anticorpos contra T. gondii, Neospora spp. e Leptospira spp. foram 22,7%, 1,5% e 3,5%, respectivamente. Os sorogrupossorovares de Leptospira spp. que apresentaram soropositividade foram: Autumnalis-Butembo; Mini-Mini; Ballum-Castellonis; Icterohaemorrhagiae-Icterohaemorrhagiae; Icterohaemorrhagiae-Copenhageni e Grippotyphosa-Grippotyphosa ou Bananal. Esse estudo demonstrou que esses agentes estão circulando em populações de gambás no estado de São Paulo. Desta forma, investigações que visam determinar o papel dos marsupiais na epidemiologia de cada doença devem ser conduzidas, especialmente visando o entendimento do comportamento desses animais como hospedeiros dessas zoonoses.(AU)

Prevalência e fatores de risco para a leptospirose e brucelose na população canina da Estância Turística de Ibiúna, São Paulo, Brasil / Prevalence and risk factors for leptospirosis and brucellosis in the canine population of the Tourist Resort of Ibiúna, State of São Paulo, Brazil

O objetivo do trabalho foi determinar a prevalência de leptospirose e brucelose por Brucella canis e determinar os fatores de risco associados com a positividade em cães da Estância Turística de Ibiúna, estado de São Paulo, Brasil. Foram examinados 570 animais distribuídos em 4 regiões nos 48 bairros do município, no período de setembro de 2007 a março de 2008. O diagnóstico sorológico da leptospirose foi efetuado com o teste de soroaglutinação microscópica (SAM), e para o diagnóstico de brucelose foi realizado hemocultivo. Dos 570 animais examinados, 187 (32,8%; IC95% 28,9 - 36,8) foram soropositivos para leptospirose, com predomínio de reações para os sorovares Pyrogenes, Autumnalis e Canicola, e 6 (1,05%; IC95% 0,4 - 2,2) foram positivos para brucelose. A variável atividade sexual (OR = 1,73) foi identificada como fator de risco associado à positividade para leptospirose, e o manejo do tipo solto foi considerado fator de risco tanto para leptospirose (OR = 1,96) quanto para brucelose (OR = 10,85). Conclui-se que a leptospirose e a brucelose estão presentes em cães da Estância Turística de Ibiúna, São Paulo, e que a atividade sexual e o acesso irrestrito à rua são condições associadas com a prevalência das infecções.(AU)

The aim of this survey was to determine the prevalence of leptospirosis and brucellosis due to Brucella canis and to determine the risk factors associated with positivity in dogs of the Tourist Resort of Ibiúna, State of São Paulo, Brazil. A total of 570 blood samples were collected from dogs from 4 regions of 48 districts of the county of Ibiúna during the period of September 2007 to March 2008. Serological diagnosis of leptospirosis was performed with the microscopic agglutination test (MAT), and blood culture was used for the diagnosis of brucellosis. Of the 570 dogs used 187 (32.8%; 95%CI 28.9 - 36.8) were seropositive to leptospirosis, with predominance of reactions to serovars Pyrogenes, Autumnalis and Canicola, and 6 (1.05%; 95%CI 0.4 - 2.2) were positive to brucellosis. Variable sexual activity (OR = 1.73) was identified as risk factor associated with the positivity to leptospirosis, and free access to street was considered risk factor for both leptospirosis (OR = 1.96) and brucellosis (OR = 10.85). It is concluded that leptospirosis and brucellosis are present in dogs of the Tourist Resort of Ibiúna, State of São Paulo, and sexual activity and free access to street are conditions associated with the prevalence of infections.(AU)

Cross-protection between experimental anti-leptospirosis bacterins

We investigated the existence of cross-protection between two anti-leptospirosis monovalent experimental bacterins produced with two strains of Leptospira serogroup Pomona: Fromm strain of serovar Kennewicky, isolated from pigs in the United States, and strain GR6 of serovar Pomona isolated from pigs in Brazil. Both were added of aluminum hydroxide as an adjuvant. Experimental bacterins were tested with the hamster potency test in order to assess protection provided against the disease and against the establishment of kidney infection. Controls were polyvalent commercial vaccine produced with Leptospira strains isolated outside Brazil, which included a representative of Pomona serovar, or Sorensen solution added of aluminum hydroxide adjuvant. The challenge was performed with cross-strains of serogroup Pomona tested in accordance with international standards established for the potency test. After 21 days of the challenge, survivors were killed to evaluate the condition of Leptospira renal carrier. Experimental bacterins protected hamsters against homologous and heterologous strains, demonstrating the existence of cross-protection. The commercial vaccine protected the hamsters challenged with both strains, but there was a high proportion of animals diagnosed as renal carriers when the challenge was performed with strain GR6, isolated from pigs in Brazil.

Controle da eficácia de bacterinas antileptospirose: relação entre os resultados dos testes de inibição de crescimento de leptospiras in vitro com os do desafio in vivo em hamsters / Efficacy of anti-leptospirosis bacterines: relation between the results of the in vitro growth inhibition test and the potency test, in vivo, with challenge in hamsters

Foi efetuada a comparação em hamsters da proteção conferida e dos níveis de anticorpos induzidos por duas bacterinas comerciais antileptospirose. Os ensaios empregados foram o teste oficial de potência com desafio (TP), o ensaio proposto, teste de inibição de crescimento de leptospiras in vitro (ICLIV) e a soroaglutinação microscópica (SAM). O protocolo de imunização foi representado por duas aplicações individuais de 0,25 mL das bacterinas, puras ou de suas diluições geométricas de razão dois variando de 200 a 51.200 para a bacterina A e de 200 a 3.200 para a bacterina B, por via subcutânea com o intervalo de 15 dias. Decorridos 15 dias da segunda aplicação de vacina, um grupo de animais foi desafiado com 0,2 mL de cultivos de leptospiras, por indivíduo, respectivamente dos sorovares Canicola (bacterinas A e B) ou Kennewicki (bacterina A). Os números de doses infectantes empregados nos desafios foram de 100 e 631 respectivamente, para os sorovares Canicola e Kennewicki. Decorridos 21 dias do desafio, os grupos de animais utilizados nos testes de ICLIV e SAM foram sangrados e os seus soros foram reunidos em pools (n = 5). No TP, adotando-se os critérios internacionais, as bacterinas foram aprovadas. A comparação do desempenho das bacterinas para os sorovares adotados, segundo sua concentração, por meio das proporções de animais sobreviventes ao TP e a média dos títulos de anticorpos identificados no teste de ICLIV, indicou que um título igual ou superior a 0,77 log corresponde ao nível de aprovação da bacterina no TP.

It was performed a comparison between the protection afforded in hamsters and the antibody levels induced by two commercial vaccines against leptospirosis. The assays used were the official challenge test (TP), the in vitro leptospires growth inhibition test (ICLIV) and microscopic agglutination test (MAT). The immunization protocol consisted of two single applications, 15 days from each other, of 0.25 mL of the bacterins, pure or its two-fold serial dilutions: 200 to 51,200 for bacterin A and 200 to 3.200 bacterin B, both of them administered subcutaneously. A group of animals was challenged, after 15 days from the second vaccine application, with 0.2 mL/animal of live leptospire cultures, with Canicola (bacterin A and B) or Kennewicki (bacterin A) serovars. The numbers of infective doses employed in the challenges were 100 and 631 for Canicola and Kennewicki serovars, respectively. After 15 days from the second vaccine dose the groups of animals used in ICLIV and SAM tests were bled and their sera were collected in pools (n = 5). In TP, adopting the criteria established by the Code Federal Regulation, both bacterins were approved. The comparison of the performance of the tested bacterins with the adopted serovars, according to its concentration, by the proportions of surviving animals to the challenge assay and the average of the neutralizing antibodies titers, established a neutralizing antibodies titer equal or higher than 0.77 log corresponding with the bacterin level of approval in the potency assay.

Emprego de estirpes Leptospira spp. isoladas no Brasil na microtécnica de soroaglutinação microscópica aplicada ao diagnóstico da leptospirose em rebanhos bovinos de oito estados brasileiros / Use of Leptospira spp. strains isolated in Brazil in the microscopic agglutination test applied to diagnosis of leptospirosis in cattle herds in eight brazilian states

O objetivo do presente trabalho foi investigar a conveniência do emprego de estirpes de leptospiras autóctones isoladas no Brasil, na coleção de antígenos da microtécnica de soroaglutinação microscópica (SAM) aplicada a leptospirose. Foram amostradas por conveniência 109 propriedades e 9820 bovinos, fêmeas em idade reprodutiva, distribuídos em 85 municípios, dos Estados de Goiás, Mato Grosso, Mato Grosso do Sul, Minas Gerais, Paraná, Rio Grande do Sul, Santa Catarina e São Paulo. Dos 9820 animais examinados, 5806 (59,12%) foram reagentes na SAM para pelo menos um sorovar com a coleção de 23 sorovares de referência. Com a coleção de antígenos de referência e dez estirpes autóctones houve 6400 (65,17%) reagentes, com diferença significativa entre as proporções (p=0,001). Os sorovares mais prováveis identificados com a coleção de antígenos de referência foram Hardjo (43,03%), Shermani (20 %), Wolffi (9,96%), Grippothyphosa (5,42%) e Pomona (4,28%). Com a coleção ampliada por dez estirpes isoladas no Brasil, os sorovares mais prováveis foram Hardjo (31,00%), Guaricura-M4/84 (22,50%), Shermani (15,43%), Wolffi (4,76%), Grippothyphosa (3,71%) e Autumnalis (3,24%). O sorovar Guaricura, estirpe M4/84, isolada de bovinos e búfalos no Estado de São Paulo, despontou como um dos três sorovares mais freqüentes nos Estados de Goiás, Mato Grosso, Mato Grosso do Sul, Minas Gerais e São Paulo. A introdução de estirpes autóctones na coleção de antígenos da SAM propiciou a confirmação do diagnóstico de leptospirose em 594 animais (6,00%) classificados como não reagentes pela coleção de referência (p=0,001).

The aim of this study was to investigate the adequacy of the use of autochthonous strains of leptospires isolated in Brazil, added to antigen collection of the microscopic agglutination test (MAT) applied to the diagnosis of bovine leptospirosis. By means of non-probability sampling, 109 farms and 9,820 cattle, females at reproductive age were chosen from 85 municipalities in the states of Goiás, Mato Grosso, Mato Grosso do Sul, Minas Gerais, Paraná, Rio Grande do Sul, Santa Catarina and São Paulo. Among the 9,820 examined animals, 5,806 (59.12%) were reactants at MAT for at least one serovar using the 23 reference serovars. Employing the collection of reference serovars and the ten autochthonous strains, 6,400 (65.24%) reactants and significant difference (p=0.001) was found. The most probable serovars identified by the collection of reference antigens were Hardjo (43.03%), Shermani (20%), Wolfi (9.96%), Grippothyphosa (5.42%) and Pomona (4.28%). With the collection amplified with the ten strains isolated in Brazil, the most probable serovars were Hardjo (31%), Guaricura-M4/84 (22.50%), Shermani (15.43%), Wolffi (4.76%), Grippothyphosa (3.71%) and Autumnalis (3.24%). The serovar Guaricura, strain M4/84, isolated from bovines and buffaloes in the State of São Paulo, was ranked as one of the three most probable serovars in the states of Goiás, Mato Grosso, Mato Grosso do Sul, Minas Gerais and São Paulo. The addition of autochthonous strains to the MAT antigen collection provided the confirmation of the diagnosis of leptospirosis in 594 cattle (6%) which have been classified as non-reactants by the reference collection (p=0.001).

Exposure of free-ranging wild carnivores, horses and domestic dogs to Leptospira spp in the northern Pantanal, Brazil

Leptospirosis is a zoonotic disease affecting most mammals and is distributed throughout the world. Several species of domestic and wild animals may act as reservoirs for this disease. The purpose of this study was to assess the exposure of free-ranging wild carnivores, horses and domestic dogs on a private reserve located in the northern Pantanal (Brazil) and the surrounding areas to Leptospira spp from 2002-2006, 75 free-ranging wild carnivores were captured in the Pantanal and serum samples were collected. In addition, samples from 103 domestic dogs and 23 horses in the region were collected. Serum samples were tested for the presence of Leptospira antibodies using the microscopic agglutination test. Thirty-two wild carnivores (42.7 percent) were considered positive with titres > 100, and 18 domestic dogs (17.5 percent) and 20 horses (74.1 percent) were also found to be positive. Our study showed that horses, dogs and several species of free-ranging wild carnivores have been exposed to Leptospira spp in the Pantanal, suggesting that the peculiar characteristics of this biome, such as high temperatures and an extended period of flooding, may favour bacterial persistence and transmission. In this region, wild carnivores and horses seem to be important hosts for the epidemiology of Leptospira species.

Ocorrência e fatores de risco associados à leptospiroseem cães atendidos em hospital veterinário no semiáridoparaibano / Occurrence and risk factors associated with leptospirosis in dogs attended in a veterinaryhospital in the semiarid of the Paraíba State, Northeast region of Brazil

Investigou-se a ocorrência de leptospirose em cães da cidade de Patos, semiárido paraibano, e realizou-se um estudode fatores de risco associados à infecção. Foram examinadas 152 amostras de soro sanguíneo de cães atendidos emhospital veterinário no período de julho a novembro de 2008. O diagnóstico da leptospirose foi realizado pela técnica desoroaglutinação microscópica, utilizando-se uma coleção de 24 sorovariedades. A frequência de animais soropositivosencontrada foi de 19,73% (IC 95% = 13,73% - 26,96%), e as sorovariedades mais frequentes foram Autumnalis (13,16%)e Grippotyphosa (1,97%). A análise de regressão logística múltipla mostrou que os fatores de risco para a leptospiroseforam a não definição da raça (odds ratio = 3,67; P = 0,009) e o contato com caprinos/ovinos (odds ratio = 10; P = 0,034).

The occurrence of leptospirosis was investigated in dogs from Patos city, semiarid of Paraíba State, Northeast region ofBrazil, and the risk factors associated with the infection were analyzed. One hundred and fifty two blood samples werecollected from dogs attended in a veterinary hospital during July to November 2008. The diagnostic method carriedout for leptospirosis was the microscopic agglutination test, using a batch of 24 leptospiral serovars. The frequency ofseropositive animals was 19.73% (95% CI = 13.73% - 26.96%) and most frequent reactant serovars were Autumnalis(13.16%) and Grippotyphosa (1.97%). The multivariate logistic regression analysis showed that the risk factors forleptospirosis were mixed breed (odds ratio = 3.67; P = 0.009) and the contact with caprine/ovine (odds ratio = 10; P =0.034).

Inquérito sorológico para toxoplasmose e leptospirose em mamíferos selvagens neotropicais do Zoológico de Aracaju, Sergipe / Serological survey of toxoplasmosis and leptospirosis in neotropical wild mammals from Aracaju Zoo, Sergipe, Brazil

Os zoológicos modernos são instituições destinadas à manutenção da fauna selvagem com o objetivo de promover a conservação, pesquisa científica, lazer, recreação e educação ambiental. A ampla variedade de espécies selvagens, vivendo em condições diferentes do seu habitat natural, representa um ambiente propício à disseminação de doenças, muitas delas zoonóticas. Devido à escassez de dados e à relevância dos mamíferos selvagens neste contexto epidemiológico, tanto na toxoplasmose, quanto na leptospirose, foi efetuado o inquérito sorológico para toxoplasmose e leptospirose em mamíferos selvagens neotropicais do Zoológico de Aracaju, Sergipe, Brasil. Para tanto foram colhidas amostras sanguíneas de 32 animais, adultos, de ambos os sexos incluindo: 14 macacos-prego (Cebus libidinosus), quatro macacos-prego-do-peito-amarelo (Cebus xanthosternus), três onças-suçuaranas (Puma concolor), uma onça-pintada (Pantheraonca), uma raposa (Cerdocyon thous), seis guaxinins (Procyon cancrivorus), dois quatis (Nasua nasua) e um papa-mel (Eira barbara). Para a pesquisa de anticorpos anti-Toxoplasma gondii foi utilizado o Teste de Aglutinação Modificada (MAT ³"1:25) e para pesquisa de anticorpos anti-Leptospira spp. foi utilizado o teste de Soroaglutinação Microscópica (ponto de corte ³1:100) com uma coleção de antígenos vivos que incluiu 24 variantes sorológicas de leptospiras patogênicas e duas leptospiras saprófitas. Dentre os 32 mamíferos, 17 (53,1 por cento) apresentaram anticorpos anti-T. gondii e quatro (12,5 por cento) foram positivos para anticorpos anti-Leptospira spp. De acordo com o sexo, 60 por cento (9/15) dos machos e 47,1 por cento (8/17) das fêmeas foram soropositivos para T. gondii e 26,7 por cento (4/15) dos machos apresentaram anticorpos anti-Leptospira spp. Dos mamíferos que apresentaram anticorpos anti-T. gondii, 47 por cento (8/17) nasceram no zoológico, 41,2 por cento (7/17) foram oriundos de outras instituições e dois (11,8 por cento) ...

Modern zoological gardens are institutions to wildlife maintenance, aiming its conservation, the performance of scientific research and leisure, recreation and environ-mental education activities. The variety of wild species living in conditions different from the one found in its natural habitats represents a propitious environment for diseases spread, specially the zoonotic ones. Due to data shortage and wild mammals' epidemio-logical relevance both for toxoplasmosis as for leptospirosis, this study aimed to determine the serological survey of toxoplasmosis and leptospirosis in Neotropical wild mammals, from Zoo of Aracaju, Sergipe, Brazil. Blood samples were collected from 32 wild mammals, adults and from both sexes: 14 wild bearded capuchins (Cebus libidinosus), four golden-bellied capuchins (Cebus xanthosternus), three pumas (Puma concolor), one jaguar (Pantheraonca), one crab-eating fox (Cerdocyon thous), six crab-eating raccoons (Procyon cancrivorus), two South American coatis (Nasua nasua), and one tayra (Eira barbara). Sera were tested to Toxoplasma gondii antibodies by the modified agglutination test (MAT e"1:25), and by the microscopic seroaglutination test (cut-off e"1:100) using 24 serovar of pathogenic leptospiras and two serovar of saprophyte leptospiras. Antibodies to T. gondii were found in 17 of 32 (53.1 percent) wild mammals, and antibodies to Leptospira spp. were found in 4 of 32 (12.5 percent) wild mammals. In relation to gender, 9 of 15 (60 percent) males, and 8 of 17 (47.1 percent) females had antibodies to Toxoplasma gondii, and 4 of 15 (26.7 percent) males had antibodies to Leptospira spp. Considering the origin of the seropositive animals to T. gondii, 8 of 17 (47 percent) were born in the zoo, 7 of 17 (41.2 percent) were from other zoos, and 2 (11.8 percent) were from the wild. Three of 4 (75 percent) mammals seropositive to Leptospira spp. were born in zoo, and 1 of 4 (25 percent) was from the wild. This is ...

Comparison of agglutinating and neutralizing antibodies to serovar hardjo in sows immunized with two commercial whole culture polivalent anti-leptospira bacterins / Comparação de anticorpos aglutinantes e neutralizantes do sorovar hardjo em fêmeas suínas imunizadas com duas bacterinas anti- leptospira comerciais

It was performed the comparison of the intensity and duration of agglutinating and neutralizing antibodies to serovar Hardjo in swines vaccinated with two commercial anti-leptospira bacterins. Sows no reactive to 24 Leptospira sp serovars in the microscopic agglutination test (MAT) were divided in three groups: Group A (n=08): received two vaccine A doses with 30 days interval, Group B (n=08) two vaccine B doses with 30 days interval and Group C (n=08): control no vaccinated against leptospirosis.Blood samples were collected each 30 days during six months following the first vaccination. The sera were tested by MAT and growth inhibition test (GIT) to serovar Hardjo in order to evaluate respectively agglutinating and neutralizing antibodies. It was found that neutralizing antibodies persisted for a longer time than the agglutinating ones and that the absence of agglutinating antibodies does not means in the absence of the neutralizing. The peaks of agglutinating antibodies was obtained at least 30 days earlier than that produced by neutralizing. The duration of both kinds of antibodies measured differed between the two bacterines tested. The period for inducing neutralizing antibodies against serovar Hardjo indicated that gilts must be immunized with two doses of whole culture anti-leptospira bacterines applied 30 days each other at least 90 days before the first mating. For the maintenance of hight levels of neutralizing antibodies the revaccinations must be performed every six months after the first vaccination.

Foi efetuada a comparação entre a intensidade e duração dos níveis de anticorpos neutralizantes e aglutinantes para o sorovar Hardjo em fêmeas suínas vacinadas com duas bacterinas comerciais anti-leptospirose. Animais caracterizados como não reatores para 24 sorovares de Leptospira sp pelo teste de soroaglutinação microscópica (SAM) e que nunca haviam sido vacinados contra a leptospirose foram divididos em três grupos: grupo A (n=08): recebeu duas doses, em intervalo de 30 dias, de bacterina comercial anti-leptospirose A; grupo B (n=08): recebeu duas doses, em intervalo de 30 dias de bacterina comercial anti-leptospirose B e grupo C (n=08): controle, não vacinado contra a leptospirose. As colheitas de sangue foram efetuadas a cada 30 dias durante seis meses a partir da primeira vacinação. Os soros foram submetidos aos testes da SAM e de inibição do crescimento de leptospiras in vitro (ICL) para avaliar, respectivamente, os níveis de anticorpos aglutinantes e neutralizantes. Foi constatado que os anticorpos neutralizantes persistem por mais tempo que os aglutinantes e que a ausência de anticorpos neutralizantes não corresponde a ausência dos aglutinantes. Os picos de anticorpos aglutinantes foram obtidos pelo menos 30 dias antes dos produzidos pelos neutralizantes. Houve diferença nos níveis de anticorpos neutralizantes induzidos pelas duas bacterinas testadas. O período de indução de anticorpos neutralizantes contra o sorovar Hardjo indica que marrãs devem ser imunizadas com duas doses de bacterina anti-leptospirose aplicadas com 30 dias de intervalo e pelo menos 90 dias antes da primeira cobertura. A manutenção de níveis elevados de anticorpos neutralizantes exige revacinações semestrais.

Isolation and characterization of Leptospira interrogans from pigs slaughtered in São Paulo State, Brazil / Isolamento e caracterização de Leptospira interrogans de suínos abatidos no Estado de São Paulo, Brasil

With the aim of isolating Leptospira spp., blood serum, kidney, liver and genital tract of 137 female swine (40 sows and 97 gilts) and also urine samples from 22 sows were collected in a slaughterhouse in the State of São Paulo, from April 2003 to August 2004. Four isolates were obtained from animals that presented microagglutination test (MAT) titers > 100 for the serovar Pomona and one was obtained from an animal negative by MAT in which Leptospira was isolated from the liver and reproductive tract. The presence of leptospiral DNA was investigated by PCR, and positive results were found in kidneys of 11 females, liver of two, genital tract of two and urine of one of them. Nephrosis, interstitial multifocal nephritis, moderate to severe changing, hyalines cylinders and hemorrhagic focuses, hepatic and uterine horns congestion were histological lesions observed in higher frequency in animals positive for leptospira. The silver impregnation (Warthin Starry) confirmed the presence of spirochetes in renal tubules of four females with positive leptospira cultures from kidneys. The serogroup of the five isolates was identified as Pomona by cross agglutination with reference polyclonal antibodies. Molecular characterization of the isolates was carried out by variable-number tandem-repeats analysis. All the isolates revealed a pattern distinct from the L. interrogans Pomona type strain, but identical to a previously identified pattern from strains isolated in Argentina belonging to serovar Pomona.

Amostras de soro sanguíneo, rim, fígado e trato genital de 137 fêmeas suínas (40 matrizes e 97 marrãs) e de urina de 22 matrizes foram colhidas em abatedouro no Estado de São Paulo, no período de abril de 2003 a agosto de 2004 tendo como objetivo o isolamento de Leptospira spp. Quatro estirpes foram isoladas de animais que apresentaram títulos, no teste de soroaglutinação microscópica (SAM) > 100, para o sorovar Pomona e de um animal, não reagente na SAM, em que houve isolamento de leptospiras do fígado e aparelho reprodutor. A presença do DNA de leptospira foi investigada pela técnica da PCR e foram observados resultados positivos nos rins de 11 fêmeas, no fígado de duas, no aparelho reprodutor de duas e na urina de uma delas. Nefrose, nefrite intersticial multifocal variando de moderada a severa, cilindros hialinos e focos hemorrágicos, congestão hepática e de cornos uterinos foram lesões histológicas evidenciadas com freqüência mais alta em animais positivos para leptospira. A impregnação argêntica (Warthin Starry) confirmou a presença de espiroquetas nos túbulos renais das quatro fêmeas onde houve cultura positiva para leptospiras dos rins. O sorogrupo dos cinco isolados foi identificado como Pomona pela técnica de aglutinação cruzada com anticorpos policlonais de referência. A caracterização molecular dos isolados foi realizada pela análise do número variável de repetições em tandem (VNTR). Os mesmos revelaram um padrão distinto da estirpe padrão de L. interrogans sorovar Pomona, porém idêntico a um padrão previamente identificado em estirpes isoladas na Argentina, pertencentes ao sorovar Pomona.

First isolation of leptospires from dairy goats in Brazil

Leptospires have never been recovered from goats in Brazil. Serum samples were obtained from 248 goats from Rio de Janeiro and from the seroreactive animals, urine samples were collected and processed for Leptospira isolation. A total of 52 positive reactions were observed, corresponding to 20.9 percent of the samples. The most prevalent reactions were to serovars Hardjo (36.5 percent), Shermani (30.8 percent), Icterohaemorrhagiae (9.6 percent), Grippotyphosa (9.6 percent), Autumnalis (5.8 percent), Castellonis (3.8 percent) and Bratislava (3.8 percent). Two strains of Leptospira sp. were isolated, both in the same region, but from different flocks. Presumptive identification based on serologic methods suggests those strains to be from Grippotyphosa serogroup.

Leptospiras nunca foram isolados de caprinos no Brasil. Amostras de soros foram obtidas de 248 caprinos no Rio de Janeiro, e, dos animais sororeativos, amostras de urina foram coletadas e processadas para isolamento de leptospiras. Um total de 52 (20,9 por cento) reações positivas foi observado. Os serovares mais prevalentes foram Hardjo (36,5 por cento), Shermani (30,8 por cento), Icterohaemorrhagiae (9,6 por cento), Grippotyphosa (9,6 por cento), Autumnalis (5,8 por cento), Castellonis (3,8 por cento) e Bratislava (3,8 por cento). Duas estirpes de Leptospira sp. foram isoladas, ambas na mesma região, mas de diferentes rebanhos. A identificação sorológica presuntiva sugere trataram-se de amostras do sorogrupo Grippotyphosa.

Detection of leptospires in clinically healthy piglets born from sows experimentally infected with Leptospira interrogans serovar Canicola

Leptospirosis is an important zoonosis that causes reproductive disorders in swine. The isolation of leptospires from aborted fetuses, stillbirths and weak piglets was obtained in several occasions, however, the bacteria was never isolated from apparently healthy piglets born from apparently healthy infected dams. Six sows of the Landrace breed with a known date of service and pregnancy confirmed by ultrasonography were infected intravenously with 5ml of Leptospira interrogans serovar Canicola inoculum between 76 and 90 days of gestation, and one week after farrowing, at least one piglet per sow was euthanized and samples of liver, kidneys, lungs, heart, spleen and gastric content were taken and examined by PCR. Reproductive disorders or any clinical sign of infection were not observed in the inoculated sows. The piglets born from these animals presented no clinical signs or macroscopic lesions that could be attributed to leptospirosis. All inoculated sows presented anti-leptospires antibodies by microscopic serum-agglutination test (MAT) in the postinoculation serum samples and leptospires were not found in the urine as well as were not detected by PCR applied in this material, however, PCR accomplished in kidneys and liver from a euthanized sow presented positive results. Of the total of 12 euthanized piglets, 10 (83.3 percent) presented positive results by PCR in at least one of the kidney, liver, heart, spleen, lung and gastric content samples. The present study reports the vertical transmission of the infection and the detection of leptospires in clinically healthy piglets born from experimentally infected sows, which is important of the epidemiological point of view as the maintenance of clinically healthy infected animals may allow the persistence of the bacteria in the herd, exposing other animals to the risk of infection.

A Leptospirose é uma importante zoonose que causa transtornos reprodutivos em suínos. O isolamento de leptospiras de fetos abortados, natimortos e leitões fracos foi obtido em várias ocasiões, porém, a bactéria nunca foi isolada de leitões aparentemente saudáveis nascidos de matrizes com infecção subclínica. Seis matrizes da raça Landrace com data de serviço conhecida e gravidez confirmada por ultrasonografia foram infectadas entre 76 e 90 dias de gestação por via intravenosa com 5 ml de inóculo de Leptospira interrogans sorovar Canicola, e uma semana após o parto, pelo menos um leitão por matriz foi eutanaziado e foram colhidas amostras de fígado, rins, pulmões, coração, baço e conteúdo gástrico para exame por PCR. Transtornos reprodutivos ou qualquer sinal clínico de infecção não foram observados nas matrizes inoculadas. Os leitões nascidos destes animais não apresentaram sinais clínicos ou lesões macroscópicas que poderiam ser atribuídos à leptospirose. Todas as matrizes inoculadas apresentaram anticorpos anti-leptospiras no teste de soroaglutinação microscópica (MAT) nas amostras de soros colhidas após a inoculação, e não foram encontradas leptospiras na urina como também não foram detectadas pela PCR aplicada neste material, porém, a PCR realizada em rins e fígado de uma matriz eutanaziada apresentou resultado positivo. Dos 12 leitões eutanaziados, 10 (83,3 por cento) apresentaram resultados positivos na PCR em pelo menos uma das amostras de rim, fígado, coração, baço, pulmão e conteúdo gástrico. O presente estudo relata a transmissão vertical da infecção e a detecção de leptospiras em leitões clinicamente saudáveis nascidos de matrizes infectadas experimentalmente, o que é importante do ponto de vista epidemiológico, pois a manutenção de animais com infecção subclínica pode permitir a persistência da bactéria no rebanho, expondo outros animais ao risco de infecção.

Comparação entre a técnica de cultivo em camada delgada de ágar Middlebrook 7H11 e meio de Stonebrink para isolamento de Mycobacterium Bovis em amostras de campo / Microcolony detection of Mycobacterium Bovis in Middlebrook 7H11 thin layer culture

O presente trabalho teve por objetivo avaliar a eficiência da técnica de cultivo em camada delgada de ágar Middlebrook 7H11 (TL7H11) no isolamento de Mycobacterium bovis de lesões sugestivas de tuberculose em bovinos, comparando seus resultados com os métodos tradicionais de cultivo. Numa primeira fase foram utilizadas estirpes padrão de M. bovis AN5 e M. tuberculosis H37Rv mantidas em laboratório, para comparação de desempenho entre o cultivo em TL7H11 e nos meios de Stonebrik e Petragnani. Ambas estirpes apresentaram crescimento visível em TL7H11 no terceiro dia de cultivo enquanto que nos meios de Stonebrink e Petragnani só houve crescimento a partir do 14° dia. Aos 13 dias de cultivo em TL7H11 foi possível diferenciar as duas estirpes pelas características morfológicas das colônias. Numa segunda fase, 62 amostras de campo foram cultivadas em TL7H11 e Stonebrink para isolamento de M. bovis. As amostras isoladas foram detectadas pelo TL7H11 até os 21 dias de cultivo contra nenhum crescimento dos tubos de Stonebrink. O tempo médio de crescimento no TL7H11 foi de 19,0 dias contra 49,0 dias do meio de Stonebrink (p = 0,014).

The aim of this article is to evaluate the efficiency of the cultivation technique in thin layer of Middlebrook 7H11 (TL7H11) for isolating Mycobactererium bovis from suggestive lesions of tuberculosis in cattle and to compare the results with traditional methods of cultivation. At the first step it was used M. bovis AN5 and M. tubercuolosis H37Rv standard strain. The both performance were compared between the cultivation in TL7H11 and in the Stonebrink and Petragnani media. The strains presented visible growing in TL7H11 at the third day of cultivation, while the Stonebrink and Petragnani there were growing just at the14° day. At the 13 day of cultivation it was possible to differentiate both strains by their colony morphological characteristics. The second step was to cultivate 62 clinicals samples in TL7H11 and Stonebrink for tentative isolation of M. bovis. The isolated samples were detected in TL7H11 until 21 days of cultivation where as none samples were grown in Stonebrink tubes. The median time of growing in TL7H11 was 19,0 days against 49,0 days of Stonebrink (p=0,014).

Brucella spp. isolation from dogs from commercial breeding kennels in São Paulo state, Brazil

Cães provenientes de 12 canis comerciais do estado de São Paulo foram submetidos à investigação clínica e a provas laboratoriais para o diagnóstico de infecção por Brucella spp. A colheita de amostras foi realizada entre os meses de abril de 2000 e fevereiro de 2002 e os exames laboratoriais empregados foram a imunodifusão em gel de ágar (IDGA) e a hemocultura. De 171 cães examinados, 39 (22,80 per center) apresentaram pelo menos um sinal clínico compatível com brucelose, 58 (33,91 per center) foram positivos pela IDGA e 24 (14,03 per center) pela hemocultura. Bactérias Gram negativas com perfil bioquímico compatível com o gênero Brucella foram isoladas das 24 amostras de sangue positivas pelo isolamento bacteriano. De acordo com o coeficiente Kappa e o teste de McNemar, não foi observada concordância entre os resultados obtidos na hemocultura e IDGA (k=0,360 com intervalo de confiança de 95 per center; X2=25,93, p=0,000), entre resultados da IDGA e do exame clínico (k=0,248 com intervalo de confiança de 95 per center; X2=6,11, p=0,013) e entre os resultados da hemocultura e do exame clínico (k=0,442 com intervalo de confiança de 95 per center; X2=6,76, p=0,009). A associação dos resultados obtidos pelos exames clínicos e laboratoriais com o sexo dos animais não foi estatisticamente significante (Qui-Quadrado), sendo observado X2=1,35 e p=0,2447 para o exame clínico, X2=1,58 e p=0,2086 para IDGA e X2=1,48 e p=0,2230 para hemocultura. Dos 12 canis examinados, sete apresentaram pelo menos um animal positivo pela hemocultura e nove pelo menos um animal positivo pela imunodifusão. A associação de dados epidemiológicos com testes laboratoriais diretos e indiretos deve ser enfatizada para o diagnóstico definitivo da brucelose canina. Resultados positivos pela imunodifusão em gel de ágar podem ser conseqüência de reações inespecíficas e devem ser confirmados pela hemocultura. Os resultados negativos obtidos pela imunodifusão também devem ser confirmados utilizando-se métodos diretos de diagnósticos ou repetindo-se o teste sorológico com 30 dias de intervalo, devido à baixa sensibilidade desse teste diagnóstico.

Influência da via de inoculação sobre o estabelecimento e a evolução da leptospirose em hamsters (Mesocricetus auratus) experimentalmente infectados com Leptospira interrogans sorovar pomona / The influence of the route of inoculation on the development of the leptospiral infection in hamsters (Mesocricetus auratus) experimentally infected with Leptospira interrogans serovar pomona

Foi investigada a influência da via de inoculação sobre o estabelecimento e a evolução da leptospirose em hamsters (Mesocricetus auratus) experimentalmente infectados com Leptospira interrogans sorovar pomona. As vias de inoculação ensaiadas foram: intraperitoneal, subcutânea, oral, conjuntival e escarificação cutânea. O inóculo infeccioso foi constituído por uma cultura em meio de Fletcher, com 20 a 30 leptospiras por campo microscópio no aumento de 200 vezes. Os animais controle foram inoculados apenas com meio de Fletcher. Foram colhidas amostras de soro sanguíneo e fragmentos de rins na fase agônica da doença ou no 21º dia pós-infecção, quando todos os animais foram sacrificados. Para a pesquisa de leptospiras, foi feito o exame direto com microscopia óptica em campo escuro e cultivo em meio de Fletcher, pela técnica das diluições seriadas. A detecção de aglutininas anti-leptospiras foi realizada pela técnica de soroaglutinação microscópica. A instalação e evolução da leptospirose foram afetadas pela via de inoculação. A via oral foi a menos efetiva em estabelecer a infecção. Não foi observada associação estatística entre a freqüência de portadores e a via de inoculação.

Epidemiologia da Leptospirose em animais silvestres na Fundação Parque Zoológico de São Paulo / Epidemiology of the Leptospirosis in wild animals at the Fundação Parque Zoológico de São Paulo

A Leptospirose é uma doença bacteriana de caráter zoonótico que afeta os animais domésticos, silvestres e o homem. Levantamentos sorológicos têm demonstrado o envolvimento de diferentes espécies sinantrópicas e silvestres na epidemiologia da doença. Com o objetivo de conhecer melhor a epidemiologia da Leptospirose dentro da Fundação Parque Zoológico de São Paulo, foi realizado um estudo sorológico nos animais silvestres mantidos em cativeiro, no período de 1996 a 1999. Foram colhidas amostras de sangue de 302 animais atendidos na rotina da Divisão de Veterinária, das quais 59 apresentaram resultado positivo (19.5 por cento) para a prova de Soroaglutinação Microscópica. Os sorovares mais prováveis para o conjunto total de resultados foram : copenhageni (15/59=25.4 por cento), pomona (13/59=22 por cento) e castellonis (10/59=16.9 por cento). Entre os animais silvestres examinados os sorovares mais prováveis foram : Família Callithrichidae : castellonis (3/3=100 por cento), Família cebidae : copenhageni : (13/21=65 por cento), grippotyphosa (2/21=9.5 por cento) e castellonis (1/21=44.7 por cento). Família felidae : pomona (12/17=70.5 por cento), icterohaemorrhagiae (2/17=11.7 por cento) e grippotyphosa (1/17=5.8 por cento), Família canidae : castellonis (2/4=50 por cento), cynopteri (1/4=25 por cento) e mini (1/4=25 por cento), Família cervidae : mini (1/1=100 por cento), Família bovidae : copenhageni (2/3=66.6 por cento), pomona (1/3=33.3 por cento), Família dasyproctidae : castellonis (2/3=66.6 por cento), Família macropodidae: sentot (1/1=100 por cento), família giraffidae : castellonis (1/1=100 por cento). Animais de vida livre como ratos (Rattus norvegicus) e gambás (Didelphis marsupialis) também foram submetidos a prova de soroaglutinação necroscópica e cultura bacteriológica. Foram encontrados testes positivos para o sorovar icterohaemorrhagiae em 42,8 por cento dos ratos e 40 por cento dos gambás estudados. As freqüências de positivos quando analisadas do ponto de vista da localização espacial dos recintos destes animais, permitiram a verificação da existência de áreas críticas para exposição à leptospira dentro da Fundação Parque Zoológico de São Paulo...

Soroprevalência de leptospirose em cães errantes da cidade de Patos, Estado da Paraíba, Brasil / Seroprevalence of leptospirosis in stray dogs from Patos city, state of Paraíba, Brazil

O presente trabalho teve como objetivo investigar a prevalência de leptospirose em cães errantes da cidade de Patos, Estado da Paraíba, Brasil. O experimento foi conduzido durante o período de fevereiro a abril de 2003, com a colheita de 130 amostras de soro canino. O diagnóstico da leptospirose foi determinado pela técnica de soroaglutinação microscópica, utilizando-se uma coleção de 22 variantes sorológicas. Para a caracterização dos sorovares mais prováveis, levou-se em conta a titulação e a freqüência. A prevalência encontrada foi de 20 por cento, com maior frequência dos sorovares autumnalis (20 por cento), pomona (17,5 por cento), grippotyphosa (10 por cento) e patoc (10 por cento).

Avaliação dos níveis de aglutininas antileptospira em cães de caça na Paraíba, Brasil

Dentre os animais domésticos, em nível urbano, os cães representam a principal fonte de infecção da leptospirose humana,pois vivem em contato direto com o homem e uma vez infectados podem eliminar leptospiras vivas através da urina durantemeses, mesmo sem apresentar sinais clínicos da doença. Particularmente, os cães de caça constituem animais de companhiaque são utilizados por adeptos da atividade esportiva de caça à procura de espécies silvestres no meio rural, sendo estauma prática comum em várias regiões do Brasil. O presente trabalho teve como objetivo pesquisar a presença de aglutininasantileptospira em cães de caça no estado da Paraíba. Foram utilizados na pesquisa 190 cães de caça provenientes de 11cidades paraibanas, sendo 172 (90,53%) machos e 18 (9,74%) fêmeas com idades variando de seis meses a 15 anos,criados em sua maioria presos e as principais espécies caçadas (informes dos proprietários) eram em ordem decrescentede freqüência: tatu-verdadeiro, tatu-peba, tejo, tacaca, tamanduá e raposa. Os soros sangüíneos de cães de caça foramprocessados pela técnica de Soroaglutinação Microscópica (SAM) no Laboratório de Doenças Transmissíveis/CSTR/UFPB.Das 190 amostras analisadas, 17 (8,95%) foram reagentes para sete sorotipos de Leptospira patogênicos, com destaquepara autumnalis, bratislava e australis, com títulos variando de 100 a 1.600.